ZETA LIFE如何高效率轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞

1. 細(xì)胞接種：提前 1 天將細(xì)胞接種到培養(yǎng)板，如 6 孔板，使用含 10% 胎牛血清的高糖型 DMEM 培養(yǎng)基，且培養(yǎng)基中不加雙抗，使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到 60%-80% 左右。

2. 質(zhì)粒準(zhǔn)備：使用無內(nèi)毒素提取試劑盒提取質(zhì)粒，將其溶解于無菌雙蒸水或超純水中，保證質(zhì)粒濃度在 500 - 700ng/ul 左右。

3. 復(fù)合物制備：將質(zhì)粒 DNA 與 Zeta Life Advanced Transfection Reagent 按照 1:1 的比例直接混合，例如 12ug 質(zhì)粒對應(yīng) 12ul 轉(zhuǎn)染試劑，用移液器吹吸 10 - 15 次混勻，室溫靜止 10 - 15 分鐘。

4. 轉(zhuǎn)染細(xì)胞：將復(fù)合物加入含有(血清)細(xì)胞培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)板中，并輕輕混勻，放入 37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

5. 細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后對細(xì)胞進(jìn)行正常換液。

6. 結(jié)果分析：對于質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染 48 - 72 小時后，通過熒光檢測來評估轉(zhuǎn)染效率；在 48 - 96 小時后，檢測 mRNA 或蛋白的表達(dá)情況。如果要進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24 - 48 小時左右，加入適量的藥物進(jìn)行篩選操作。